唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim. ex Balf.)为蓼科大黄属(Rheum Linn.)多年生强大草本植物, 为中药材大黄的原植物之一, 青海省是其盛名的谈地产区。唐古特大黄的药用历史悠久, 具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒等功效[1]。当代药理学商酌标明, 与这三种主邀功效关连的活性因素可分为四类, 即具有抑菌功效的游离蒽醌类因素, 具有泻下功效的迷惑蒽醌类因素和双蒽酮类因素, 具有抗凝血功效的多酚类因素(主如果没食子酸和儿茶素)[2-6]。大黄为我国传统常用巨额中药材巨屌, 《中华东谈主民共和国药典》(2015版)收载的含大黄因素的中成药多达105种, 天下中药制剂中含有大黄因素的比例高达10%[7]。
药用资源化学因素的种类及含量的地域性互异是中药材谈地性的一种具体体现。特定生态环境条款与遗传基因相得益彰, 充分体现了中药的荒芜性、纯正性和继承性。《本草经集注》“诸药所生, 齐挑升境”, 《唐本草》“离其原土, 则质同而效异”, 这些记录都证实了生态环境对中药品性影响的进军性。有商酌者合计“物种内质料变异巧合大于种间互异”是当代谈地论的中枢想想[8]。另有学者商酌发现, 不同产地的唐古特大黄其功效组分含量有显赫互异, 且化学因素与环境因子间存在强关联性[9]。大黄是多谈地产区药用植物的典型代表, 青海和甘肃是唐古特大黄和掌叶大黄(Rheum palmatum L.)的主产区。因此, 唐古特大黄品性地域性以及与产地局势间的响应关系是阐释唐古特大黄谈地性的进军法子。
古东谈主用产地看成谈地药材品性的映射体现出举座性想想, 药材的谈地性成因是中医药畛域商酌的热门。当今, 对中药谈地性形成的环境因子和生物因子等虽有所商酌, 但经常是针对个别因子的单因子影响商酌, 短少对环境因子的概括性和系统性商酌[10-20]。当今, 对不同产区大黄的因素互异及炮制标准, 资源散播以及药理商酌较多[21-28], 但对影响唐古特大黄品性形成的局势因子和响应特征的商酌还比拟少[29-30], 尤其是尚未见到接洽唐古特大黄与多标准局势因子的系统性商酌。因此, 本文基于不同产地唐古特大黄的功效组分含量对多产地的唐古特大黄进行生态型差异, 并基于多标准局势因子和多种数学统计标准, 系统商酌局势因子与唐古特大黄品性的响应特征, 明确谈地药材唐古特大黄的局势响应特征, 探索唐古特大黄品性地舆变异的局势成因, 揭示大黄不同化学生态型形成的生态学机制, 为唐古特大黄高品性缓助区选址过火资源可执续发展提供商酌依据。
1 材料与标准 1.1 材料 1.1.1 唐古特大黄样本文中对于唐古特大黄样本点信息和化学功效组分含量的数据引自李莉对不同谈地产区大黄药材质料特征的商酌效果[31]。本文访问的唐古特大黄样本点共11批, 分别来自于大黄的主要产区四川、甘肃、宁夏、青海省。商酌样本的采样信息见表 1, 样本点散播图见图 1。
1.1.2 局势数据本文所继承的局势数据包含三个时间标准(表 2), 当先是4个年均因子, 起首于中国状况数据网分享平台;其次是17个反应季节性变化的概括局势因子, 起首于世界局势数据库(), 为1970—2000年监测数据的平均值, 空间分辨率为2.5 min;然后是4个月均因子, 反应温度、降水和日照等因子在月际间的动态变化。
骚波妹影视 1.2 标准 1.2.1 唐古特大黄品性测定继承HPLC法测定唐古特大黄样品中游离蒽醌类(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)、总蒽醌(芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚)、迷惑蒽醌(总蒽醌含量-游离蒽醌含量)、多酚类(没食子酸、儿茶素)、双蒽酮苷类(番泻苷A、番泻苷B)等组分含量。Agilent1100高效液相色谱仪(DAD二极管阵列检测器), 色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相为0.05%的磷酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0—10 min, 5%B—11%B;10—30 min, 11%B—15%B;30—45 min, 15%B—17%B;45—60 min, 17%B—22%B;60—75 min, 22%B—36%B;75—90 min, 36%B—60%B;90—105 min, 60%B;105—110 min, 60%—5%B);流速1.0 mL/min1;检测波长250nm; 柱温40℃;进样量10μL。
1.2.2 数据分析继承Excel和SPSS 25.0进行统计数据分析, 愚弄Matlab、Prism 8.0进行图表绘图。用Analyze-Descriptive Statistics法标准化惩办不同量纲数据, 得到标准化效果后进行数据统计分析。聚类分析将数据线性标准化后继承系统聚类法, 分析标准继承组间集结和Pearson距离法。关连性分析继承SPSS中Pearson关连性分析。
2 效果与分析 2.1 唐古特大黄品性地舆变异不同产地间唐古特大黄4种功效组分间的含量具有显着的地舆变异(表 3)。图 2涌现青海和甘肃所产唐古特大黄聚成一类, 四川产唐古特大黄单独成一类。图 3涌现不同地区唐古特大黄4种功效组分含量有显赫性变化, 尤其是游离蒽醌类、迷惑蒽醌类和多酚类化学物资含量随处域变化很大。字据4种功效组分含量, 唐古特大黄可差异为青海-甘肃型和四川型两种化学生态型。其中青海-甘肃型中迷惑蒽醌和多酚类物资含量比拟高, 而四川型中游离蒽醌含量比拟高。青海-甘肃型中迷惑蒽醌类含量比例为66.9%, 而四川型中游离蒽醌类含量比例为70%。图 4涌现不同地区大黄多酚类因素也具有显着地舆变异, 其中青海-甘肃型样本中多酚类因素含量高于四川型样本, 而双蒽酮类因素莫得显着的地域互异。
2.2 唐古特大黄品性对局势因子的响应基于年-季-月不同技巧标准的局势因子, 逐次分析唐古特大黄品性与局势因子间的响应关系。
2.2.1 年均局势因子图 5涌现唐古特大黄4种因素与年均日照时数呈正关连。游离蒽醌类物资与4个年均局势因子关连性最弱, 其次是双蒽酮类物资, 而迷惑蒽醌类物资和多酚类物资与4个年均局势因子都有一定的关连性。
表 4可知迷惑蒽醌和多酚类物资与4种年均因子有较大关连性。其中, 迷惑蒽醌类物资与年均温呈显赫负关连;多酚类物资与年均缓和年降水呈负关连, 而与日照正关连。证实低温少雨且日照时间长的地区适应迷惑蒽醌和多酚类物资的产生与积蓄。
2.2.2 季度局势因子表 5证实四类组分中只须迷惑蒽醌和多酚类物资与局势因子间有一定关连性, 这与2.2.1中论断是一致的。
在0.01水平上, 与迷惑蒽醌类物资具有显赫负关连的局势因子Bio 9(最干季平均温度)、Bio 11(最冷季平均温度), 证实低温有意于迷惑蒽醌类物资的累积;在0.05水平上, 与迷惑蒽醌类物资具有负关连性的局势因子有Bio 3(等温性)、Bio 5(最热月份最高温)、Bio 6(最冷月份最低温)、Bio 10(最热季平均温度), 证实温度变化剧烈的地区有助于迷惑蒽醌类物资的积蓄, 最热月份和最冷月份温度越低对迷惑蒽醌物资形成越有意;而与Bio 4(温度季节性变化扫数)呈现显赫正关连, 证实温度变化剧烈有意于迷惑蒽醌物资形成。
在0.01水平上, 多酚类物资与Bio 3(等温性)负关连, 与Bio 4(温度季节性变化扫数)正关连, 证实一年中的温度变化剧烈有意于多酚类物资形成。在0.05水平上, 与多酚类物资具有显赫负关连的局势因子为Bio 2(日夜温差月均值)、Bio 9(最干季平均温度)、Bio 11(最冷季平均温度)、Bio 16(最湿季降雨量)、Bio 18(最暖季降雨量), 证实日夜温差大和最冷季的低温有助于多酚类物资累积, 同期降水量越少越有助于多酚类物资形成。
总之, 温差大(日夜温差, 季节温差), 温度低且降水量少的区域有助于唐古特大黄中迷惑蒽醌类和多酚类物资的形成和累积。
2.2.3 月均因子通过2.2.1和2.2.2商酌标明, 降水量、均缓和日照均影响唐古特大黄的组分形成, 为深刻商酌局势因子对各因素的动态影响, 进一步分析在月均标准上三个因子与唐古特大黄功效组分间的关连性, 效果见表 6、图 6、表 7。
表 6涌现除了游离蒽醌与每月平均气温(7月和8月以外)呈现正关连外, 其他三种功效组分与每月平均气温都是负关连, 合适2.2.1部分论断。其中, 与迷惑蒽醌类物资呈强负关连的是1月至6月气缓和9月至12月气温, 证实最干季节的低温对迷惑蒽醌累积有意。而月气温对多酚类物资的影响不显赫, 只须1月至4月气缓和12月气温低温对多酚类物资累积有促进作用。
图 6证实每月平均降水量只须对多酚类物资有一定的响应。多酚类物资与6—7月平均降水量、9—10月平均降水量呈负关连, 证确实最湿季降水量越少越有助于多酚类物资形成。
表 7证实, 每月平均日照量与迷惑蒽醌和多酚类物资都呈正关连。尤其是多酚类物资在唐古特大黄滋长季节呈现出与日照的强正关连性, 证确实唐古特大黄的滋长季, 日照量对多酚类物资累积有促进作用。
2.3 大黄不同品性区局势特征上述商酌效果证实, 只须月均缓和月均日照量与迷惑蒽醌和多酚类物资呈强关连性。因此, 通过分析这两种因子在唐古特大黄不同品性区的局势互异, 以期取得唐古特大黄不同品性区的局势特征。
图 7涌现两区域的月均温差呈现大-小-大的漏斗形, 即1到4月份温差较大, 而从5月到8月两区域间的温差变小, 从9月到12月温差又变大。证实影响迷惑蒽醌和多酚类物资累积的主要时间窗口(最冷季)内, 两区域间的月均温有较大互异。图 8涌现青海-甘肃区域内的每个月的月均日照量都高于四川区域, 但在5—8月份技巧, 两地区间差值较小。字据表 5和表 6的论断, 最冷季月均温与迷惑蒽醌物资和多酚类物资均呈负关连, 而每月日照量与多酚类物资呈正关连, 青海-甘肃地区由于最冷季(1至5月份, 9至12月份)每月平均气温远低于四川地区, 且每月日照量均高于四川地区, 是以青海-甘肃地区迷惑蒽醌物资和多酚类物资含量高于四川地区, 这正巧阐释了青海-甘肃地区和四川地区的唐古特大黄品性存在互异的局势原因。
3 商榷药用植死一火学因素含量的地域性互异是中药材谈地性的一种具体体现。“产之有地, 采之巧合, 清洁加工, 依古炮制”, 证实一定的产地环境是保险谈地药材好品性的进军法子[32]。
3.1 唐古特大黄化学因素地舆变异除双蒽酮类因素外, 不同产地间唐古特大黄中功效组分含量具有显着的地舆变异, 可差异为青海-甘肃型和四川型两种化学生态型。其中, 青海-甘肃型中迷惑蒽醌和多酚类物资含量比拟高, 而四川型是游离蒽醌含量比拟高。由于大黄泄下功效的主要物资基础是迷惑蒽醌类物资, 因此, 青海和甘肃地区唐古特大黄的泄下功效比拟强[33-34]。
3.2 唐古特大黄品性与局势因子的响应本文初度继承不同技巧标准的局势因子, 商酌影响唐古特大黄品性形成的枢纽局势因子和主要时间窗口。
(1) 在年均因子端倪上, 迷惑蒽醌和多酚类2种组分与4种年均因子具有一定的关连性。低温少雨且日照时间长的地区适应迷惑蒽醌和多酚类物资的积蓄。由于甘肃-青海和四川地区在温度、日照和降水方面的互异, 导致了不同地区唐古特大黄在迷惑蒽醌和多酚类物资含量存在显着互异。
(2) 在季均因子端倪上, 温度变化剧烈且最冷季度时(最干季度)温度低的地区, 有意于迷惑蒽醌类物资的累积。同期, 温度变化幅度大(日夜温差、季节性浮动), 最冷季温度低且降水量少的地区, 有助于多酚类物资形成。这与年均标准因子论断一致。
(3) 在月均因子端倪上, 只须迷惑蒽醌和多酚类物资与月均温度因子和日照因子间具有强关连性, 这一论断在三个时间标准上具有一致性。效果标明, 最冷季度时温度越低越有意于迷惑蒽醌类物资和多酚类物资的累积。每月平均日照量与迷惑蒽醌和多酚类物资都呈正关连, 尤其是对多酚类物资影响最大。关连性商酌数据标明, 多酚类物资在唐古特大黄滋长季节呈现出与日照的强正关连性, 证确实唐古特大黄的滋长季, 高日照量对多酚类物资累积有促进作用。
一言以蔽之, 月均缓和月均日照量是导致青海-甘肃和四川两个产区唐古特大黄品性互异的主要局势原因, 且两地区间局势互异的主要时间窗口为1—6月份和9—12月份。这与车国东等[35]所商酌栽培唐古特大黄蒽醌含量的季节动态变化效果相一致。本文基于多端倪局势因子的关连性商酌效果, 探讨了谈地药材唐古特大品性地域互异的局势成因。
3.3 唐古特大黄品性形成因素探讨及商酌预测中药材品性的形成受环境、遗传等诸多因素的影响。有学者发现不同谈地产区唐古特大黄药材质料产生互异的原因与其遗传布景互异接洽系[36-37]。此外巨屌, 有学者合计环境是影响唐古特大黄组分的主要因素, 其次才是种源[38]。而环境主如果包括局势和泥土因素, 泥土对药用植物的滋长发育、活性因素的合成积蓄有较大影响[39]。有商酌标明药用植物锁阳两个谈地产区泥土微生物群落存在千般性互异[40];不同的泥土养分元素和无机元素互异导致大黄药材功效组分间的含量有显赫互异, 这也进一步证实泥土因素亦然形成药材谈地性的主导因子[41]。由此可知, 不同地区的局势和泥土条款互异是导致药材品性区域变异的主要生态因素。本文注视从多端倪局势因子角度深刻商酌形成唐古特大黄品性互异的局势原因, 探索影响唐古特大黄品性形成的枢纽局势因子和主要时间窗口, 在后续的唐古特大黄品性商酌中会陆续探究泥土条款对唐古特大黄品性的影响。同期, 进一步对唐古特大黄进行代谢组学商酌和产区试种, 盼愿全面揭示唐古特大黄谈地性的生态机制。